本產(chǎn)品是使用 SYBR Green I 嵌合熒光法進(jìn)行 qPCR 的專用試劑。 核心組分 Perfect Start DNA Polymerase 是基于化學(xué)法修飾的熱啟動(dòng) DNA聚合酶，配合針對(duì) qPCR 優(yōu)化的***適 Buffer,可以有效抑制非特異擴(kuò)增，從而顯著提高擴(kuò)增效率，適用千進(jìn)行高靈敏度的 qPCR 反應(yīng)。本產(chǎn)品是一種含有 qPCR 反應(yīng)錄適濃度 SYBR Green I 的 2x 預(yù)混試劑，可以在寬廣的定量區(qū)域內(nèi)得到良好的標(biāo)準(zhǔn)曲線，對(duì)靶基因進(jìn)行準(zhǔn)確定量、檢測(cè)，重復(fù)性好，可信度高。 本產(chǎn)品中含有特殊的ROX Passive Reference Dye,適應(yīng)千所有 qPCR 儀器，無(wú)需在不同儀器上調(diào)整 ROX 的濃度，只需在配制反應(yīng)體系時(shí)加入引物和模板即可進(jìn)行擴(kuò)增。

適用機(jī)型Bio-Rad CFX96™， CFX384™ ， iCycler iQ™ ， iQ™5， MyiQ™ ，MiniOpticon™ ， Opticon® ， Opticon 2 ， Chromo4™ ； CepheidSmartCycle®；Eppendorf Mastercycle® ep realplex，realplex 2 s；llluminaEco qPCR ； Qiagen/Corbett Rotar-Gene®Q ， Rotor-Gene® 3000 ，Rotor-Gene® 6000；Roche Applied Science LightCycler™ 480; ThermoScientific PikoReal Cycler；Applied Biosystems 5700，7000，7300，7700，7900，7900HT, 7900HT Fast；StepOne™，StepOnePlus™；AppliedBiosystems7500 ， 7500 Fast ， ViiA™7 ； Stratagene MX4000™ ，MX3005P™，MX3000P™。注意：本產(chǎn)品使用特殊的 ROX Passive Reference Dye, 適用于所有qPCR 儀器（無(wú) ROX 校正儀器，低濃度 ROX 校正儀器，高濃度 ROX校正儀器），無(wú)需在不同儀器上調(diào)整 ROX 的濃度。注意事項(xiàng)1. 使用前請(qǐng)上下顛倒輕輕混勻，盡量避免起泡，并經(jīng)短暫離心后使用。2. 本產(chǎn)品中含有 SYBR Green I 熒光染料和 ROX 染料，保存本產(chǎn)品或配制 PCR 反應(yīng)液時(shí)應(yīng)避免強(qiáng)光照射。3. 如需頻繁使用，可存放于 2-8℃，盡量避免反復(fù)凍融，反復(fù)凍融可能使產(chǎn)品性能下降。

使用方法1. 在 qPCR 管中配制如下混合液(以 20ul 反應(yīng)體系為例)。

試劑                                                                       20ul 體系 

PerfectQ Universal Green qPCR Premix              10 ul 

Forward Primer，                                                 10uM 0.4ul 

Reverse Primer，                                                 10uM 0.4ul 

Template DNA /cDNA XulRnase-free Water      up to 20ul

注意：反應(yīng)體系中各組分的量可根據(jù)以下原則自行調(diào)整：a. 一般來(lái)說(shuō)，反應(yīng)體系中引物終濃度為 0.2uM 即可得到較好的擴(kuò)增效果。當(dāng)反應(yīng)性能比較差時(shí)，可以在終濃度 0.1-1.0uM 范圍內(nèi)調(diào)整引物濃度。b. qPCR 靈敏度*高，建立反應(yīng)體系時(shí)加入模板量的準(zhǔn)確程度對(duì)最終定量結(jié)果會(huì)有很大的影響。推薦將模板稀釋后加入反應(yīng)體系中，這樣可以有效提高實(shí)驗(yàn)的重復(fù)性。c. 如模板類型為未稀釋 cDNA 原液，使用體積不應(yīng)超過(guò) qPCR 反應(yīng)總體積的 1/10。2. 按下列條件進(jìn)行 qPCR 反應(yīng)

注意：a. Perfect Start DNA Polymerase 需要熱激活處理以恢復(fù)酶活，請(qǐng)至少設(shè)置 PCR 反應(yīng)預(yù)變性條件為 95°C 5min。如果模板的 GC 含量較高，可將預(yù)變性時(shí)間延長(zhǎng)至 10min。。b. 延伸時(shí)間請(qǐng)根據(jù)使用的 Real-time PCR 儀所需要的數(shù)據(jù)采集最短時(shí)間限制自行調(diào)整使用 ABI 7700 和 7900HT 時(shí)至少 30s; 使用 ABI 7000和7300時(shí)至少31s; 使用ABI 7500時(shí)至少34s; 使用ABI StepOnePlus™時(shí)至少 10s。c. 儀器類型不同，融解曲線采集程序不盡相同，使用儀器默認(rèn)融解曲線采集程序即可。